|
1） 防止模板中的重復(fù)序列互補(bǔ)結(jié)合，擴(kuò)增較長(zhǎng)片段 PCR技術(shù)由于可以特異性擴(kuò)增極微量的DNA片段，而在法醫(yī)學(xué)、親子鑒定和分子生物學(xué)研究中得到廣泛的運(yùn)用。但是，由于擴(kuò)增的DNA片段中可能含有多個(gè)不規(guī)則重復(fù)序列，這寫含有重復(fù)序列的基因可以在退火時(shí)發(fā)生模版鏈內(nèi)或鏈間雜交從而妨礙較長(zhǎng)序列DNA的擴(kuò)增。PNA的出現(xiàn)決絕了這個(gè)問題。在PRC反應(yīng)體系中，加入與DNA模版中間重復(fù)序列互補(bǔ)的PNA片段，該P(yáng)NA片段與DNA模版退火雜交，從而封閉已變性的DNA模版中的重復(fù)序列。PNA與DNA模板退火退火雜交溫度一般較高（78℃），在此溫度下，模板中間的重復(fù)序列彼此不會(huì)雜交，當(dāng)PNA封閉已變性的DNA模板中的重復(fù)序列后，降低溫度使PCR引物與變性的DNA模版兩端雜交（溫度一般為60攝氏度），然后升高溫度（72℃）以完成PCR反應(yīng)的延伸過程，與此同時(shí)將PNA與模板分離。用此方法可以擴(kuò)增出較長(zhǎng)的DNA片段。
2） 捕獲特異性片段 從復(fù)雜的混合物中捕獲特異性DNA和RNA片段，捕獲效率和特異性方面比使用DNA更好。Boffa等用生物素標(biāo)記的PNA先與染色體中互補(bǔ)DNA片段結(jié)合，再與磁性親和素微球鏈接后，將含CAG重復(fù)序列的轉(zhuǎn)錄基因從染色體中分離出來了。
3）分析DNA序列中的點(diǎn)突變 PNA與DNA或RNA鏈形成的PNA/DNA 和 PNA/RNA 熱穩(wěn)定性高且對(duì)堿基錯(cuò)配數(shù)敏感，一個(gè)堿基錯(cuò)配可使Tm值大幅下降。利用PNA此特點(diǎn)可以不用測(cè)序就能分析DNA序列中的點(diǎn)突變。如，Czerny等發(fā)明了一種PNA定向PCR鉗技術(shù)，它不需要測(cè)序，僅用簡(jiǎn)單的一步就能發(fā)現(xiàn)點(diǎn)突變的存在。這種技術(shù)主要用來探測(cè)某段DNA片段中有沒有某種已知的點(diǎn)突變。原理是：先設(shè)計(jì)好相應(yīng)的PNA片段，如果DNA片段中沒有突變，PNA則與DNA序列牢固結(jié)合，PCR不能進(jìn)行。如果有點(diǎn)突變，則PNA不能與DNA序列結(jié)合，PCR能順利進(jìn)行。 這樣通過設(shè)計(jì)不同的PCR引物跟相應(yīng)的PNA， 就可以得到針對(duì)不同點(diǎn)突變檢測(cè)的方法。
【打印此文】【關(guān)閉窗口】 |
| 上一篇:無 下一篇：無 |
研究進(jìn)展
肽核酸（PNA）在基因診斷方面的運(yùn)用
發(fā)布時(shí)間：2017/7/14
